咬文嚼字：胤煌科技帶您精讀中國藥典2020版0903不溶性微粒檢查法

中國藥典2020版0903不溶性微粒檢查法：

本法系用以檢查靜脈用注射劑（溶液型注射液、注射用無(wú)菌粉末、注射用濃溶液）及供靜脈注射用無(wú)菌原料藥中不溶性微粒的大小及數量。

（咬文嚼字1：上文說(shuō)明一個(gè)事實(shí)，那就是靜脈用注射液如傳統的打吊瓶、屁股針、打疫苗及特殊病癥用藥如胰島素等注射液最終會(huì )進(jìn)入靜脈血管的，都需進(jìn)行不溶性微粒檢查。）

本法包括光阻法和顯微計數法。當光阻法測定結果不符合規定或供試品不適于用光阻法測定時(shí)，應釆用顯微計數法進(jìn)行測定，并以顯微計數法的測定結果作為判定依據。

（咬文嚼字2：不溶性微粒檢查法有兩種具體方法，第二種方法是第一種方法的結果驗證，說(shuō)明第一種方法在有些局限條件下是不準確的。）

光阻法不適用于黏度過(guò)高和易析出結晶的制劑，也不適用于進(jìn)入傳感器時(shí)容易產(chǎn)生氣泡的注射劑。對于黏度過(guò)高，采用兩種方法都無(wú)法直接測定的注射液，可用適宜的溶劑稀釋后測定。

（咬文嚼字3：光阻法的實(shí)驗操作局限性很多，無(wú)法允許實(shí)驗員的細微實(shí)驗誤差，如搖晃、震蕩、樣品沉積等，而顯微計數法對顆粒進(jìn)行清洗和分析，避免許多假性結果的影響。）

試驗環(huán)境及檢測 試驗操作環(huán)境應不得引入外來(lái)微粒，測定前的操作應在潔凈工作臺進(jìn)行。玻璃儀器和其他所需的用品均應潔凈、無(wú)微粒。本法所用微粒檢查用水（或其他適宜溶劑），使用前須經(jīng)不大于1.0μm的微孔濾膜濾過(guò)。

取微粒檢查用水（或其他適宜溶劑）符合下列要求：光阻法取50ml測定，要求每10ml含10μm及10μm以上的不溶性微粒數應在10粒以下，含25μm及25μm以上的不溶性微粒數應在2粒以下。顯微計數法取50ml測定，要求含10μm及10μm以上的不溶性微粒數應在20粒以下，含25μm及25μm以上的不溶性微粒數應在5粒以下。

（咬文嚼字4：實(shí)驗過(guò)程必須處于潔凈空間，無(wú)塵服和超凈臺就成了必bei環(huán)境，微粒檢查用水需要進(jìn)行測定符合要求后使用，但這還不算完，每次使用前還得經(jīng)不大于1μm的濾膜過(guò)濾，這是實(shí)驗前準備工作的bi備條件。）

第一法（光阻法）（所需儀器：光阻法不溶性微粒儀）

測定原理 當液體中的微粒通過(guò)一窄細檢測通道時(shí)，與液體流向垂直的入射光，由于被微粒阻擋而減弱，因此由傳感器輸出的信號降低，這種信號變化與微粒的截面積大小相關(guān)。

（咬文嚼字5：光阻法的測定原理是靠顆粒對光強的遮擋，然后將顆粒的最大截面等效為顆粒的大小，但顆粒的形狀千奇百怪，無(wú)法準確判定顆粒的真實(shí)大小。）

對儀器的一般要求 儀器通常包括取樣器、傳感器和數據處理器三部分。

測量粒徑范圍為2～100μm，檢測微粒濃度為0～10000個(gè)/ml。

儀器的校準  所用儀器應至少每6個(gè)月校準一次。

（1）取樣體積 待儀器穩定后，取多于取樣體積的微粒檢查用水置于取樣杯中，稱(chēng)定重量，通過(guò)取樣器由取樣杯中量取一定體積的微粒檢查用水后，再次稱(chēng)定重量。以?xún)纱畏Q(chēng)定的重量之差計算取樣體積。連續測定3次，每次測得體積與量取體積的示值之差應在±5%以?xún)?。測定體積的平均值與量取體積的示值之差應在±3%以?xún)?。也可釆用其他適宜的方法校準，結果應符合上述規定。

（2）微粒計數 取相對標準偏差不大于5%，平均粒徑為10μm的標準粒子，制成每1ml中含1000～1500微粒數的懸浮液，靜置2分鐘脫氣泡，開(kāi)啟攪拌器，緩慢攪拌使其均勻（避免氣泡產(chǎn)生），依法測定3次，記錄5μm通道的累計計數，棄第一次測定數據，后兩次測定數據的平均值與已知粒子數之差應在±20%以?xún)取?/span>

（3）傳感器分辨率 取相對標準偏差不大于5%，平均粒徑為10μm的標準粒子（均值粒徑的標準差應不大于1μm），制成每1ml中含1000～1500微粒數的懸浮液，靜置2分鐘脫氣泡，開(kāi)啟攪拌器，緩慢攪拌使其均勻（避免氣泡產(chǎn)生），依法測定8μm、10μm和12μm三個(gè)通道的粒子數，計算8μm與10μm兩個(gè)通道的差值計數和10μm與12μm兩個(gè)通道的差值計數，上述兩個(gè)差值計數與10μm通道的累計計數之比都不得小于68%。若測定結果不符合規定，應重新調試儀器后再次進(jìn)行校準，符合規定后方可使用。

（咬文嚼字6：光阻法儀器的傳感器經(jīng)常會(huì )不準確，無(wú)法提供精確數據，且必須經(jīng)常校準，校準結果都在允許的偏差內，說(shuō)明該儀器的準確度并不高，在當前人們對生命安全越發(fā)重視的今天，醫藥研發(fā)并不允許出現如此多的誤差存在。）

如所使用儀器附有自檢功能，可進(jìn)行自檢。

檢查法

（1）標示裝量為25ml或25ml以上的靜脈用注射液或注射用濃溶液除另有規定外，取供試品至少4個(gè)，分別按下法測定：用水將容器外壁洗凈，小心翻轉20次，使溶液混合均勻，立即小心開(kāi)啟容器，先倒出部分供試品溶液沖洗開(kāi)啟口及取樣杯，再將供試品溶液倒入取樣杯中，靜置2分鐘或適當時(shí)間脫氣泡，置于取樣器上（或將供試品容器直接置于取樣器上）。開(kāi)啟攪拌，使溶液混勻（避免氣泡產(chǎn)生），每個(gè)供試品依法測定至少3次，每次取樣應不少于5ml，記錄數據，棄第一次測定數據，取后續測定數據的平均值作為測定結果。

（2）標示裝量為25ml以下的靜脈用注射液或注射用濃溶液除另有規定外，取供試品至少4個(gè)，分別按下法測定：用水將容器外壁洗凈，小心翻轉20次，使溶液混合均勻，靜置2分鐘或適當時(shí)間脫氣泡，小心開(kāi)啟容器，直接將供試品容器置于取樣器上，開(kāi)啟攪拌或以手緩緩轉動(dòng)，使溶液混勻（避免產(chǎn)生氣泡），由儀器直接抽取適量溶液（以不吸入氣泡為限），測定并記錄數據，棄第一次測定數據，取后續測定數據的平均值作為測定結果。

（1）、（2）項下的注射用濃溶液如黏度太大，不便直接測定時(shí)，可經(jīng)適當稀釋?zhuān)婪y定。

也可采用適宜的方法，在潔凈工作臺小心合并至少4個(gè)供試品的內容物（使總體積不少于25ml），置于取樣杯中，靜置2分鐘或適當時(shí)間脫氣泡，置于取樣器上。開(kāi)啟攪拌，使溶液混勻（避免氣泡產(chǎn)生），依法測定至少4次，每次取樣應不少于5ml。棄第一次測定數據，取后續3次測定數據的平均值作為測定結果，根據取樣體積與每個(gè)容器的標示裝置體積，計算每個(gè)容器所含的微粒數。

（3）靜脈注射用無(wú)菌粉末除另有規定外，取供試品至少4個(gè)，分別按下法測定：用水將容器外壁洗凈，小心開(kāi)啟瓶蓋，精密加入適量微粒檢查用水（或適宜的溶劑），小心蓋上瓶蓋，緩緩振搖使內容物溶解，靜置2分鐘或適當時(shí)間脫氣泡，小心開(kāi)啟容器，直接將供試品容器置于取樣器上，開(kāi)啟攪拌或以手緩緩轉動(dòng)，使溶液混勻（避免氣泡產(chǎn)生），由儀器直接抽取適量溶液（以不吸入氣泡為限），測定并記錄數據；棄第一次測定數據，取后續測定數據的平均值作為測定結果。

也可采用適宜的方法，取至少4個(gè)供試品，在潔凈工作臺上用水將容器外壁洗凈，小心開(kāi)啟瓶蓋，分別精密加入適量微粒檢查用水（或適宜的溶劑），緩緩振搖使內容物溶解，小心合并容器中的溶液（使總體積不少于25ml），置于取樣杯中，靜置2分鐘或適當時(shí)間脫氣泡，置于取樣器上。開(kāi)啟攪拌，使溶液混勻（避免氣泡產(chǎn)生），依法測定至少4次，每次取樣應不少于5ml，棄第一次測定數據，取后續測定數據的平均值作為測定結果。

（4）供注射用無(wú)菌原料藥按各品種項下規定，取供試品適量（相當于單個(gè)制劑的最大規格量）4份，分別置取樣杯或適宜的容器中，照上述（3）法，自“精密加入適量微粒檢查用水（或適宜的溶劑），緩緩振搖使內容物溶解"起，依法操作，測定并記錄數據，棄第一次測定數據，取后續測定數據的平均值作為測定結果。

（咬文嚼字7：藥典規定光阻法檢查前需“小心翻轉20次"、“混合均勻"、“緩緩振搖"等均可能產(chǎn)生氣泡、新的粒子、容器顆粒污染、新的化學(xué)反應等導致實(shí)驗結果出現誤差的情況出現，故不推薦使用光阻法。）

結果判定

（1）標示裝量為100ml或100ml以上的靜脈用注射液除另有規定外，每1ml中含10μm及10μm以上的微粒數不得過(guò)25粒，含25μm及25μm以上的微粒數不得過(guò)3粒。

（2）標示裝量為100ml以下的靜脈用注射液、靜脈注射用無(wú)菌粉末、注射用濃溶液及供注射用無(wú)菌原料藥除另有規定外，每個(gè)供試品容器（份）中含10μm及10μm以上的微粒數不得過(guò)6000粒，含25μm及25μm以上的微粒數不得過(guò)600粒。

（咬文嚼字8：《中國藥典》對注射劑中不溶性微粒的控制僅限于粒徑≥10和25 μm的微粒數，對粒徑＜10μm的卻沒(méi)有具體要求，實(shí)際上，人體最小的毛細血管內徑僅有4～7 μm，嬰、幼兒的毛細血管更細，只有粒徑在2 μm以下的微粒才可能通過(guò)腎交換被排出體外，而粒徑為2～10 μm的微粒無(wú)法被排出。微粒進(jìn)入體內造成危害的部位一般多在肺、腦、腎、眼等處，較大的微粒會(huì )直接造成局部循環(huán)障礙、引起血管栓塞或導致肉芽腫，且有短期內可見(jiàn)的特點(diǎn)，而粒徑為2～10 μm的微粒則可能造成潛伏性的更大危害。）

第二法（顯微計數法）（所需儀器：顯微計數法不溶性微粒儀）

對儀器的一般要求  儀器通常包括潔凈工作臺、顯微鏡、微孔濾膜及其濾器、平皿等。

潔凈工作臺  高效空氣過(guò)濾器孔徑為0.45μm，氣流方向由里向外。

顯微鏡  雙筒大視野顯微鏡，目鏡內附標定的測微尺（每格5～10μm）。坐標軸前后、左右移動(dòng)范圍均應大于30mm，顯微鏡裝置內附有光線(xiàn)投射角度、光強度均可調節的照明裝置。檢測時(shí)放大100倍。

微孔濾膜  孔徑0.45μm、直徑25mm或13mm，一面印有間隔3mm的格柵；膜上如有10μm及10μm以上的不溶性微粒，應在5粒以下，并不得有25μm及25μm以上的微粒，必要時(shí)，可用微粒檢查用水沖洗使符合要求。

檢查前的準備  在潔凈工作臺上將濾器用微粒檢查用水（或其他適宜溶劑）沖洗至潔凈，用平頭無(wú)齒鑲子夾取測定用濾膜，用微粒檢查用水（或其他適宜溶劑）沖洗后，置濾器托架上；固定濾器，倒置，反復用微粒檢查用水（或其他適宜溶劑）沖洗濾器內壁，控干后安裝在抽濾瓶上，備用。

（咬文嚼字9：顯微計數法，顧名思義，借助顯微鏡進(jìn)行計數，傳統的顯微鏡計數，通過(guò)印有格柵的標準濾膜進(jìn)行過(guò)濾干燥，人眼進(jìn)行觀(guān)察計數，由于人工操作計數，成百上千的粒子在視野中呈現，會(huì )導致視覺(jué)疲勞最終引起實(shí)驗結果的誤差，當前市場(chǎng)上已經(jīng)有通過(guò)圖像算法進(jìn)行顆粒計數的顯微計數法不溶性微粒儀，無(wú)需人眼觀(guān)察計數，全程由計算機進(jìn)行處理計數，結果準確度高且方便快捷。）

檢查法

（1）標示裝量為25ml或25ml以上的靜脈用注射液或注射用濃溶液除另有規定外，取供試品至少4個(gè)，分別按下法測定：用水將容器外壁洗凈，在潔凈工作臺上小心翻轉20次，使溶液混合均勻，立即小心開(kāi)啟容器，用適宜的方法抽取或量取供試品溶液25ml，沿濾器內壁緩緩注入經(jīng)預處理的濾器（濾膜直徑25mm）中。靜置1分鐘，緩緩抽濾至濾膜近干，再用微粒檢查用水25ml，沿濾器內壁緩緩注入，洗滌并抽濾至濾膜近干，然后用平頭鑷子將濾膜移置平皿上（必要時(shí)，可涂抹極薄層的甘油使濾膜平整），微啟蓋子使濾膜適當干燥后，將平皿閉合，置顯微鏡載物臺上。調好入射光，放大100倍進(jìn)行顯微測量，調節顯微鏡至濾膜格柵清晰，移動(dòng)坐標軸，分別測定有效濾過(guò)面積上最長(cháng)粒徑大于10μm和25μm的微粒數。計算三個(gè)供試品測定結果的平均值。

（2）標示裝量為25ml以下的靜脈用注射液或注射用濃溶液除另有規定外，取供試品至少4個(gè)，用水將容器外壁洗凈，在潔凈工作臺上小心翻轉20次，使混合均勻，立即小心開(kāi)啟容器，用適宜的方法直接抽取每個(gè)容器中的全部溶液，沿濾器內壁緩緩注入經(jīng)預處理的濾器（濾膜直徑13mm）中，照上述（1）同法測定。

（3）靜脈注射用無(wú)菌粉末及供注射用無(wú)菌原料藥除另有規定外，照光阻法中檢查法的（3）或（4）制備供試品溶液，同上述（1）操作測定。

結果判定

（1）標示裝量為100ml或100ml以上的靜脈用注射液除另有規定外，每1ml中含10μm及10μm以上的微粒數不得過(guò)12粒，含25μm及25μm以上的微粒數不得過(guò)2粒。

（2）標示裝量為100ml以下的靜脈用注射液、靜脈注射用無(wú)菌粉末、注射用濃溶液及供注射用無(wú)菌原料藥除另有規定外，每個(gè)供試品容器（份）中含10μm及10μm以上的微粒數不得過(guò)3000粒，含25μm及25μm以上的微粒數不得過(guò)300粒。

（咬文嚼字10：顯微計數法不溶性微粒儀，可以將注射液中的不溶性微粒全部呈現在一張照片中，通過(guò)外表觀(guān)察及機器判斷，來(lái)追查出粒子的真實(shí)來(lái)源，并在往后的實(shí)驗或生產(chǎn)中加以改進(jìn)或避免。不僅可以統計出藥典需求的顆粒數據統計，且可以觀(guān)察各個(gè)顆粒的真實(shí)長(cháng)寬高，從而為實(shí)驗人員提供建議和意見(jiàn)。）