AAV/LVV為載體的眼用注射液的不溶性微粒檢查

腺病毒相關(guān)病毒（adeno-associated virus，AAV）是一類(lèi)單鏈線(xiàn)狀DNA缺陷型病毒，有多種血清型，且不同血清型的AAV具有不同的組織器官靶向性。通過(guò)修飾、突變AAV的外殼蛋白序列產(chǎn)生新的組織傾向性的血清型。安全性高、可長(cháng)期表達，治療效果持久，且易于純化，被視為最有前途的基因轉移載體之一，在世界范圍內的基因治療和疫苗研究中得到廣泛應用。全球已有多個(gè)基因治療產(chǎn)品上市。

慢病毒載體（Lentivirus, LV）是細胞和基因療法常用的遞送載體之一，它的主要功能是將目的基因轉移并整合到宿主細胞的基因組中，可以用來(lái)研究基因水平上的生物學(xué)調控機制。作為一種宿主范圍很廣的病毒載體，它們能夠轉導分裂和非分裂細胞，例如神經(jīng)元、造血干細胞和免疫細胞，尤其是T細胞。近年來(lái)，慢病毒轉導技術(shù)已經(jīng)成功應用于CAR-T細胞的制備。

隨著(zhù)AAV和LVV相關(guān)載藥技術(shù)的不斷進(jìn)步，其相關(guān)制劑的不溶性微粒檢查也受到越來(lái)越多的關(guān)注，特別是基于A(yíng)AV和LVV載藥技術(shù)的眼用注射液。眼用注射液作為眼用制劑的重要方面，其不溶性微粒檢查主要是參照USP789 眼用溶液的標準。

USP789關(guān)于不溶性微粒的檢查規定了兩種方法，第一種是光阻法，第二種是顯微計數法，但是兩種方法的判定標準是一致的，具體詳見(jiàn)下圖：

本文將通過(guò)一款特殊的LVV眼用注射液對比兩種方法的一個(gè)差別：

樣品信息如下：

光阻法-不溶性微粒測試結果如下圖所示：

由上圖可以看出，大于等于10μm以上的微粒為929.67個(gè)/ml，大于等于25μm以上的微粒為40.67個(gè)/ml，大于等于50μm以上的微粒為0個(gè)/ml，根據USP789光阻法判定標準，判定樣品不符合檢查的規定。

顯微計數法-不溶性微粒測試結果如下圖所示：

由上圖可以看出，大于等于10μm以上的微粒為9個(gè)/ml，大于等于25μm以上的微粒為3個(gè)/ml，大于等于50μm以上的微粒為2個(gè)/ml，根據USP789顯微計數法判定標準，判定樣品符合檢查的規定。

結論：

兩種不同的方法，測試結果確實(shí)有非常大的差別，主要原因是：

1 一般眼用注射液相關(guān)制劑裝量都比較少，要滿(mǎn)足光阻法的檢查一般需要混合多支進(jìn)行檢查，或者進(jìn)行稀釋進(jìn)行檢查，無(wú)論哪種方法，在制樣的過(guò)程中容易產(chǎn)生氣泡，加上體系本身少量的硅油會(huì )被當成微粒，造成很多假性的結果，因此導致樣品測試結果不合格；

2 顯微計數法跟光阻法相比，是整支全部進(jìn)行檢查，不需要考慮裝量的影響，制備樣品的過(guò)程中，同時(shí)可以去除氣泡和硅油等的影響，反映體系真實(shí)的不溶性微粒結果；同時(shí)可以通過(guò)觀(guān)察不溶性微粒的形貌去溯源不溶性微粒的來(lái)源，改善產(chǎn)品工藝，提高產(chǎn)品質(zhì)量。

下圖為L(cháng)VV眼用制劑中的一些特征不溶性微粒圖片：

檢查儀器如下圖所示：

胤煌科技(YinHuang Technology)是一家專(zhuān)注于為醫藥、半導體及化工材料等行業(yè)提供檢測分析設備及技術(shù)服務(wù)的高科技公司，致力于為客戶(hù)提供全面、準確的檢測分析和解決方案。主營(yíng)產(chǎn)品包括不溶性微粒分析儀，可見(jiàn)異物檢查分析儀，原液粒度及Zeta電位分析儀，CHDF高精度納米粒度儀，高分辨納米粒度儀，溶液顏色測定儀，澄清度測定儀等，公司自主研發(fā)的YH-MIP系列顯微計數法不溶性微粒儀、YH-FIPS系列流式動(dòng)態(tài)圖像法粒度儀，YH-FIPS系列微流成像顆粒分析儀已經(jīng)在生物醫藥、半導體及材料化工領(lǐng)域得到廣泛應用。